血液中乙醇的測定 頂空氣相色譜法

血液中乙醇的測定

頂空氣相色譜法

1 范圍

本技術(shù)規范規定了血液中乙醇的頂空氣相色譜測定方法。

本技術(shù)規范適用于血液中乙醇的定性及定量分析。

本技術(shù)規范的方法檢出限為0.01mg/mL；定量下限為0.05mg/mL。

2 規范性引用文件

下列文件對于本技術(shù)規范的應用是*的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本技術(shù)規范。凡是不注日期的引用文件，其版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)規范。

GB/T 6682  分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）

GA/T 122  毒物分析名詞術(shù)語(yǔ)

3 原理

本法利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內標，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測器進(jìn)行檢測，經(jīng)與平行操作的乙醇對照品比較，以保留時(shí)間進(jìn)行定性分析；以峰面積為依據，用內標法定量。

4 試劑和材料

除另有說(shuō)明外，水為GB/T 6682規定的二級水。

4.1　乙醇

色譜純。

4.2　乙醇標準溶液

精密稱(chēng)取適量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇標準儲備溶液。儲備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。試驗中所用其它濃度的標準溶液均從上述儲備液稀釋而得，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為3個(gè)月。

4.3　叔丁醇

色譜純。

4.4　叔丁醇溶液

精密稱(chēng)取適量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇儲備液。儲備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為12個(gè)月。將儲備液用水稀釋?zhuān)?0.0μg/mL叔丁醇內標工作液，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。

5 儀器

5.1　氣相色譜儀

配火焰離子化檢測器（FID）。

5.2　頂空進(jìn)樣器

配1mL定量進(jìn)樣環(huán)。

5.3　樣品瓶

10mL，頂空自動(dòng)進(jìn)樣器用。

5.4　硅橡膠墊

5.5　鋁帽

5.6　密封鉗

5.7　精密移液器

5.8　自動(dòng)稀釋儀

6 測定步驟

6.1　樣品處理

用精密移液器或自動(dòng)稀釋儀取待測血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇內標工作液，加入樣品瓶?jì)?，蓋上硅橡膠墊，用密封鉗加封鋁帽，混勻。

6.2　測定

6.2.1　頂空氣相色譜測定參考條件

a） 色譜柱（1）：DB-ALC1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛細管柱或相當者；

柱溫：恒溫40°C；

色譜柱（2）：DB-ALC2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛細管柱或相當者；

柱溫：恒溫40°C；

b）載氣：氮氣，純度≥99.999%，流速8mL/min；

c）進(jìn)樣口溫度：150°C；

d）檢測器溫度：250°C；

e）加熱箱溫度：65°C；

f）定量環(huán)溫度：105°C；

g）傳輸線(xiàn)溫度：110°C；

h）氣相循環(huán)時(shí)間：3.5min；

i）樣品瓶加熱平衡時(shí)間：10.0min；

j）樣品瓶加壓時(shí)間：0.10min；

k）定量環(huán)充滿(mǎn)時(shí)間：0.10min；

l）定量環(huán)平衡時(shí)間：0.05min；

m）進(jìn)樣時(shí)間：1.00min。

6.2.2　定性測定

樣品溶液按照頂空氣相色譜測定條件測定，以叔丁醇為內標，記錄色譜峰的保留時(shí)間。將待測樣品色譜峰的保留時(shí)間與乙醇標準對照品的保留時(shí)間比較，相對誤差在±2%內，空白對照樣品內標物色譜峰正常而無(wú)乙醇的色譜峰，一般可以認為待測樣品中含有乙醇；必要時(shí)，選擇不同的色譜條件或用氣相色譜-質(zhì)譜法確證。如果內標物色譜峰正常，而無(wú)乙醇的色譜峰時(shí)，可認為檢驗結果為陰性。乙醇對照品和內標氣相色譜圖，參見(jiàn)附錄A。

6.2.3　定量測定

本方法采用內標法－校準曲線(xiàn)法或內標法－單點(diǎn)校正法定量測定。

6.2.3.1  內標法－校準曲線(xiàn)法

采用內標-校準曲線(xiàn)法測定（見(jiàn)附錄B）。將乙醇對照品溶液進(jìn)樣，以乙醇和內標峰面積比為縱坐標，乙醇對照品工作溶液濃度為橫坐標繪制標準曲線(xiàn)，用標準曲線(xiàn)對待測樣品進(jìn)行定量，所測樣品中乙醇的濃度值應在線(xiàn)性范圍內。

6.2.3.2  內標法－單點(diǎn)校正法

待測血液樣品乙醇濃度在標準溶液濃度的±30%內可用單點(diǎn)法定量。

6.3　平行試驗

按以上步驟對同一待測樣品進(jìn)行平行試驗。

單柱單檢測器兩份樣品測定結果按兩份樣品的平均值計算，雙樣相對相差不得超過(guò)10％（有凝塊的血樣不超過(guò)15％）。雙樣相對相差按式（1）計算：

                                    | C1 - C2|

雙樣相對相差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100     ………………………………（1）

                                      `C

式中：

C1、C2¾¾兩份樣品平行定量測定的結果；

`C ¾¾兩份樣品平行定量測定結果的平均值(C1+C2)/2。

雙柱雙檢測器兩份樣品測定結果的相對標準偏差RSD（%）若不超過(guò)5％時(shí)（有凝塊的血樣不超過(guò)10%），結果按兩份樣品結果的平均值計算。

7 結果計算

血液中乙醇濃度測定采用內標法－校準曲線(xiàn)法定量或按式(2)計算：

                                 A´ Ai′´c         

                   C = ¾¾¾¾¾¾         …………………………………（2）

                                  A′´Ai            

式中：

C¾¾血液樣品中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

A¾¾血液樣品中乙醇的峰面積；

A′¾¾標準溶液中乙醇的峰面積；

Ai′¾¾標準溶液中內標物的峰面積；

Ai¾¾血液樣品中內標物的峰面積；

c¾¾標準溶液中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL)。

附　錄　A
（資料性附錄）
乙醇對照品和內標氣相色譜圖

A.1 按色譜柱（1）條件得乙醇對照品和內標氣相色譜圖，見(jiàn)圖A.1。

圖A.1 按色譜柱（1）條件得的乙醇對照品和內標氣相色譜圖

A.2 按色譜柱（2）條件得乙醇對照品和內標氣相色譜圖，見(jiàn)圖A.2。